步骤①收集藻细胞:将两种藻细胞培养液进行预处理后,离心取沉淀物。
步骤②获取叶绿体粗:提物4℃下分别破碎两种藻细胞后,再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。
步骤③去除杂质DNA:向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液,37℃静置15min后,离心取沉淀物。
步骤④粗提叶绿体DNA:向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,60℃水浴2h,离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇,在4℃下离心取 ? 。
步骤⑤纯化叶绿体DNA:向粗提溶液中加入3mol·L-1醋酸钠及预冷的95%酒精,低温静置1h后,离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1~2次,取沉淀物用超纯水溶解。
步骤⑥DNA纯度和浓度:测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度,结果如上下表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。