如图为划线分离法接种的示意图，下列说法正确的是（　　）

A、观察或比较各种细菌菌落形态的最佳区域是①

B、图中所示的4次划线后，都应将接种环放在酒精灯上灼烧

C、图中所示的4次划线前，都应将接种环放在酒精灯上灼烧

D、图中④区域最可能出现单菌落，①区域不可能出现单菌落