下图表示某种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E₁表示某限制酶的切割位点，现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，下列选项中不可能出现的是（ ）

A、

B、

C、

D、