在分离和纯化土壤中自生固氮菌的实验中，不合理的操作是（ ）

A、取土表3-5cm以下土层的土壤

B、用无菌水稀释土壤样品

C、使用牛肉膏蛋白胨培养基

D、用接种环进行划线接种