平板划线法纯化大肠杆菌，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线，从开始实验到实验完毕，一共需要灼烧接种环几次（　　）

A、2

B、4

C、5

D、6